Rapporteur-e-s : CHOMILIER Jacques, PREVOST Chantal
Examinateur-rice-s : BARBI Maria, CORREIA Natalia, JOLY Laurent, RAHBE Yvan
Directeur-rice-s de thèse : LESIEUR Claire, SERGHEI Anatoli
Résumé :
Les protéines sont des molécules fortement étudiées à cause de leurs différents rôles et de l’impact de leurs disfonctionnements sur l’état de santé des organismes vivants. Ces dernières années, des études ont montré qu’une protéine ne possède pas une seule conformation (structure 3D) pour répondre à sa fonction, mais plusieurs. Au jour d’aujourd’hui, différentes techniques existent pour détecter et déterminer la conformation protéique, toutefois aucune technique ne permet de reconstituer l’ensemble des conformations adoptées par une protéine en criblant individuellement chacune des conformations qui le constitue.
Le travail de ce mémoire est de déterminer si la combinaison du nanoconfinement et de la spectroscopie diélectrique à large bande est utilisable pour cribler différentes conformations protéiques et ainsi essayer de reconstituer l’ensemble conformationelle d’une protéine. Le nanoconfinement est utilisé pour réduire l’hétérogénéité conformationelle qui existe au sein d’une population à l’échelle macroscopique. La spectroscopie diélectrique à large bande caractérise la dynamique moléculaire qui est étroitement liée à la conformation protéique. Cette méthode peut donc être utilisée comme outil pour étudier l’impact d’un changement de conformation sur la dynamique moléculaire.
Mon travail de thèse a démontré que la combinaison du nanoconfinement et de la spectroscopie diélectrique à large bande pouvait être utilisée pour cribler différentes conformations protéiques en modifiant les dimensions du confinement. Différentes conformations des sous-unités B pentamériques de la toxine du choléra (CtxB5), de l’enterotoxine thermolabile (LTB5), et du lysozyme ont été observées. Les différences entre les signaux diélectriques des deux toxines révèlent des structures locales de dynamiques distinctes, alors que les différences avec le lysozyme révèlent des structures globales de dynamiques distinctes. Ces résultats ouvrent des perspectives pour diagnostiquer des impacts structuraux et/ou dynamiques liés à des mutations, dont l’implication dans le développement de maladies ou la conception de médicaments pourra être explorées dans le cadre de thérapies personnalisées.
Mots-clés : protéine, nanoconfinement, spectroscopie diélectrique à large bande, conformation, dynamique moléculaire, crible
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